程序控制冷凍裝置俗稱:程序降溫儀,也稱為程序冷凍儀、胚胎冷凍儀、細(xì)胞冷凍儀、程控降溫儀;廣泛用于凍存細(xì)胞、胚胎等。采用微機(jī)控制技術(shù),軟件,能較準(zhǔn)確地控制液氮的施放量,從而保證被凍存的生物制品以適宜的冷凍速率降溫冷凍。該儀器具有操作簡便、人機(jī)界面清楚。
程序降溫儀是實現(xiàn)生物材料深低溫保存的關(guān)鍵設(shè)備,根據(jù)降溫及控制原理不同,可以將其分為兩類:①液氮噴射式降溫儀。②升降式降溫儀。它們均以液氮為制冷源。程序降溫儀主要由冷卻室、低溫電磁閥、風(fēng)扇、溫度傳感器、放大電路、微處理機(jī)和液氮容器組成。
液氮噴射式降溫儀適合較大容積樣本的降溫保存,優(yōu)點在于控溫好,受外界環(huán)境干擾小,但是其價格昂貴,液氮消耗量大,液氮中如有少量水分就會造成輸送管道堵塞和低溫電磁閥失靈。
升降式降溫儀由液氮容器、步進(jìn)機(jī)、微機(jī)控制系統(tǒng)和記錄儀組成。它是利用液氮的自然蒸發(fā)在杜瓦瓶頸部所形成的溫場(0~-196℃),由步進(jìn)機(jī)根據(jù)預(yù)先設(shè)定的降溫、復(fù)溫程序控制生物標(biāo)本在此溫度區(qū)內(nèi)上下移動的速率,來控制標(biāo)本的溫度和降溫速率。
程序降溫儀步驟:
(1)冷凍前24-48小時更換半量或全量培養(yǎng)基,使細(xì)胞處于指數(shù)生長期。
(2)配制冷凍保存溶液(使用前配制):另取一離心管,加入培養(yǎng)基、血清,逐滴加入二甲基亞砜(DMSO)至20%濃度,即制成雙倍的凍存液,置于室溫下待用。
(3)離心收集培養(yǎng)之細(xì)胞,用加血清的培養(yǎng)基重懸起細(xì)胞,取少量細(xì)胞懸浮液(約0.1ml)計數(shù)細(xì)胞濃度及凍前存活率。
(4)取與細(xì)胞懸液等量的凍存液,緩慢逐滴加入細(xì)胞懸液,并晃動試管,制成細(xì)胞凍存懸液(DMSO后濃度為5~10%),使細(xì)胞濃度為1~5×106cells/ml,混合均勻,分裝于已標(biāo)示*之冷凍保存管中,1~2ml/vial,并取少量細(xì)胞懸浮液作污染檢測。嚴(yán)密封口后,注明細(xì)胞名稱、代數(shù)、日期。然后進(jìn)行凍存。