一、厭氧罐法

　　1.厭氧罐體的結構

　　目前使用的厭氧罐的罐體采用透明聚碳酸酯硬質(zhì)塑料或不銹鋼制成。圓形罐蓋的周邊凹槽內(nèi)嵌有橡皮圈，能使罐體和蓋密封。罐體與罐蓋之間有一個大的金屬螺旋夾，可使罐體密閉。罐體內(nèi)蓋的正中下方，有個金屬絲網(wǎng)盒或金屬盤，用于放催化劑。

　　2.厭氧罐的原理

　　用物理或化學的方法把密閉容器中的氧除去，制造一個無氧環(huán)境。常用的方法是油氣換氣法和氣體發(fā)生袋法。

　　抽氣換氣法：先把需厭氧培養(yǎng)的平板或液體瓶放入真空厭氧缸或厭氧罐中，再放入鈀粒催化劑(可使罐中的氧與氫反應生成水，除去氧)和美藍指示劑(缸中有氧時，指示劑為藍色，缸中無氧時，指示劑變無色),然后利用真空泵對真空厭氧缸或厭氧罐抽真空，再反復充入無氧的氮氣3次，后充入80%的氮氣、10%的氫氣和10%二氧化碳的混合氣體。鈀粒能夠促使混合氣體中氧反應掉，美藍指示劑顯示無色，則厭氧環(huán)境形成。鈀粒催化劑用過后，經(jīng)干熱2h后可重復使用。打開觀察培養(yǎng)物后需重新抽氣換氣。

　　該法利用化學方法造成無氧環(huán)境，簡便易行。該方法是在厭氧罐中放一個氫氣、二氧化碳氣體發(fā)生袋、催化劑、美藍指示劑。在鈀粒催化劑的作用下，罐中的氧氣和氫氣反應生成水，從而造成罐內(nèi)的無氧環(huán)境。氣體發(fā)生袋是由一丸朋氫化鈉氯化鈷合劑、一丸碳酸氫鈉檸檬酸合劑及一片濾紙條組成。使用時剪去部分的一角，加入10 mL水，水沿濾紙滲到兩個試劑丸上，發(fā)生反應，產(chǎn)生氫氣和二氧化碳。

　　使用時，加水后應立即放入罐中并密閉，即可厭氧培養(yǎng)。

　　二、厭氧袋法

　　厭氧袋是一種無毒、透明不透氣的復合塑料薄膜袋。袋中裝有產(chǎn)生氫氣和二氧化碳的安剖瓶1只，已還原成無色的美藍指示劑安剖瓶1只和鈀催化劑。使用時，把需培養(yǎng)的平皿放入?yún)捬醮?，用彈簧夾夾緊袋口，呈密閉狀態(tài)，先折斷氣體發(fā)生安瓿瓶，反應結束后(0.5 h左右),再折斷美藍指示劑安瓿瓶，若指示劑不顯色，則可進行培養(yǎng)。

　　厭氧培養(yǎng)箱的使用注意事項：

　　1.儀器盡可能地安裝于空氣清凈、溫度變化較小的地方；

　　2.開機前應全面熟悉和了解各組成配套儀器、儀表的使用說明，掌握正確使用方法；

　　3.培養(yǎng)物放入必須是在操作室內(nèi)達到厭氧環(huán)境后放入；

　　4.如發(fā)生故障（停氣等原因）操作室內(nèi)仍可保持12小時厭氧狀態(tài)（超過12小時則根據(jù)需要把培養(yǎng)物取出另作處理）；

　　5.經(jīng)常注意氣路有無漏氣現(xiàn)象；

　　6.調(diào)換氣瓶時，注意要扎緊氣管，避免流入含氧氣體；

　　7.真空泵按要求使用，定期檢查加油。